j9九游会普通dna产物纯化试剂盒核酸纯化试剂黑斑蛙属两栖纲无尾目蛙科侧褶蛙属，又称黑斑侧褶蛙、田鸡，正在我邦普 及散布于除海南、云南、西藏、青海和台湾以外的各区域。黑斑蛙有低脂肪、低胆固醇、高卵白的便宜，有较高的食用和药用价钱，是我邦近年 来养殖=◁蛙 =○类中的紧要△种类之一。其养殖具有进入少、产出高、周期短、效益上等特性，近年来我邦 黑斑蛙养 殖业…兴盛非常 迅猛。然而，跟着黑斑 蛙人工养殖○界限的增 加，养殖情况展现恶化，加之不行熟的养殖身手，黑斑蛙的病害也逐年增加，给养 殖户酿○成▽庞 杂经■ 济失 ○掉。目前<▽strong>核酸纯化试△剂，j9九游会登录入口首页已有致病性洛菲不动杆菌、嗜水气单胞菌、气单胞菌、肺炎克雷伯菌、米尔伊丽莎白菌、脑膜炎脓毒黄杆 □菌 和脑★膜败血伊丽 莎□白菌等劝化黑斑蛙后 导致其吃★ ◁ 紧弃世的报■道。 蛙歪头病，因蛙◁发△病时颈部歪斜而得名，该病沾染性强，弃世率高，目前=尚无稳■固有用的 ○歇养设施，是蛙养殖进 程中常▽睹的疾病之一。2019年7月，湖北石首市大垸农场养殖 黑斑蛙大面积弃世，病蛙展现范例的头部变歪、单侧或者双侧眼球 混=浊发白 和腹水症状，发病温度为25～△28 ℃，发病率达80%，弃世率高达90%。对病蛙脑、肝、脾和肾脏举办病原菌差别，并通过病原菌的状态特性、心理生化特点、16S rRNA★ 基 =因测○ 序与编制 发 育■对差 □ 别菌株举 办判=决，确定该病原菌的种属职位；然后通过人工劝化试验和构制病理学分解确定该病原菌 …的致病性；终末通过药物敏锐试验○分解该病原菌的药物 敏锐性，以期为该病的临床防…治用药供应科学诱导和外面支持。 患病黑斑蛙取自湖 北省石首大垸农场，搜罗患有歪头、单侧或者双 侧眼球混浊发白和腹水★症状的黑斑 蛙，共20只，均匀体重为(48。0±1。0)g；强健黑斑蛙购自■荆 州 市○枣○林铺黑△斑◁=蛙养殖○基地，均匀体重为(50。0±1。0)g，共140只，暂养于长江大学□动科学院○用于后★续攻★毒 试□ ○■验。 LB△固体和液体造■就基购自青岛海博有 限公司，革兰氏染色液和苏木精伊红染色液购自北京索莱宝科技有限公司，API 20E试剂盒购自法邦梅里埃生化公司，甲醛、二甲苯、无水乙 醇和 固体白腊等=购自邦药集团○化学试剂有限公 司，药敏纸片购自杭州天和 微生物试剂有限公司，Taq酶、dNTPs、细菌基因▽组提取试○ 剂盒均购高傲连宝生物工程有限公司，PCR扩增引 物合成和扩增产品的测序均由武汉擎科创复活物科技有限公司完毕。 光学显 微镜购 自奥林巴斯，PCR仪器购自SensoQuest，生物构制白腊包埋机购自湖北安立信医疗实业 有限公司，白腊切片机购自德邦徕卡。 无菌前提下从病蛙脑、肝、脾和肾等部位，j9九游会登录入口首页用无菌接种环取样后划 线接 种于LB固体□造=就基 将BS H ■3菌株划线接种于LB固体造就基上，置于28 ℃恒 温造就箱中造就24h，j9九游会登录入口首页观测○细◁菌菌 落状态特性与颜色，丈量菌落直径巨细。挑选单■菌 ■落用革兰氏染 色液举办革◁兰氏…染色后，显微镜观测细菌染色特性。 菌株BSH3的心理生化目标行使API 20E试剂盒举办 检测，操作设施详睹该试剂盒仿▽单，通过APIweb□判决软 件判读试验结果，并参照伯杰氏细菌判决手册中细菌心理生化目标举办确认。 取自然发病黑斑蛙的脑、肝、脾和肾构制(0。5cm×0。5cm×0。2cm)，置于4%众聚甲 ◁○醛■固定△ 液中固…定…48h后，举办通例▽白腊切□片和 HE 染色，Olympus显微镜下观测构制病理▽转折。 强健黑斑蛙试验前正在50cm×40cm×30cm的塑料筐中暂养2周，每框20只，共7框。框中列…入曝气水使其淹□过★黑斑蛙背= =部，并放入一块泡沫板。暂养和试 验时期水温连结正 在25～28 ℃，按期换水。暂养行进行抽样检测，确定试验 用 蛙不带领 病○○原菌。 将差别纯化的菌株BSH3接种于LB液体造就基28 ℃振荡造就24h后，8000离心10mi ○n重淀菌◁体，去上清后用无 菌PBS稀释成浓度为1。0×10、1。0×10、1。0×10、1。0×10、1。0×10、1。0×○ 10C FU/m ○○▽L…的▽菌= ○★■★ ○液。每组20只。采用大腿○打○针法□举 ▽办 ○人 工劝化，试验组每只打针0。2mL分歧浓度菌悬液，比较○组打 针等 体 积的PBS。相联观测8d，逐日早上9点和下昼5点 纪录试验蛙 的临床症 状及弃△世环境，并将刚弃世蛙的脑构制再次举办细▽菌…差别与判决。采用寇 氏法推算菌株BSH3的 半致死浓度(LC)。 采用纸片琼脂扩○散法检测菌株BSH3药物敏锐性。最初将BSH3菌株接种于LB液体造就基，28 ℃振 荡造就24 h 后，8000离心10min重 淀菌体，用无 菌PBS稀释菌体至0。5个麦氏浓。
